1.发现DCDC2是ICC新型肿瘤相关抗原

研究者首先通过20K人类蛋白质组芯片（华盈生物提供此检测服务）筛选患者血清中的肿瘤相关自身抗体（TAAbs），结果发现了DCDC2自身抗体在肝内胆管癌（ICC）中高表达且与预后不良相关。20K人类蛋白质组芯片筛选出了31种肿瘤相关自身抗体（TAAb），并分析其对应基因在肿瘤组织中的表达水平，发现了DCDC2表达水平在CCA（尤其是ICC）中特异性显著上调。通过多个独立队列（FUDAN和TCGA-CHOL）验证了DCDC2的mRNA和蛋白在ICC组织中的高表达及膜分布异常，并证实ICC患者血清中DCDC2自身抗体水平显著升高，免疫组化进一步显示DCDC2高表达与ICC患者不良预后相关。这些发现表明，DCDC2自身抗体和DCDC2蛋白表达有望作为ICC早期诊断和预后的生物标志物。

2.DCDC2通过激活AKT信号通路促进ICC细胞增殖和转移

研究者通过慢病毒系统在ICC细胞系（HCCC-9810和HuCC-T1）中过表达DCDC2，并进行了体外细胞增殖CCK-8实验、克隆形成能力集落形成实验以及迁移和侵袭Transwell实验，实验结果显示过表达DCDC2显著增强了ICC细胞的增殖，克隆形成，迁移，侵袭能力。体内实验进一步证实，DCDC2过表达增强肿瘤生长（异种移植模型）和肝转移（脾脏注射模型）。机制上，RNA-seq和GSEA分析显示DCDC2高表达激活PI3K-AKT信号通路，并通过Western blot验证了AKT磷酸化水平升高。使用AKT抑制剂处理后，DCDC2的促癌效应被逆转，表明DCDC2通过PI3K-AKT通路驱动ICC进展。这些结果揭示了DCDC2作为ICC促癌因子的功能及其依赖AKT激活的作用机制。

3. DCDC2通过上调FGL1表达促进ICC免疫逃逸

为进一步探讨DCDC2对ICC免疫微环境的影响。研究者通过分析RNA-seq和TCGA-CHOL数据集，发现DCDC2高表达与免疫相关通路如TCR-PLCG-ITPR、CD80/CD86-CTLA4-PP2A等富集相关，推测DCDC2可能通过免疫调节促进ICC进展。人源化小鼠异种移植和同源模型的单细胞测序结果显示DCDC2并没有影响免疫细胞比例。分析免疫检查点配体的表达，发现了LAG3的配体FGL1显著上调，且在临床样本中DCDC2与FGL1表达呈正相关。进一步研究发现过表达DCDC2显著降低CD8+T细胞中细胞毒性细胞因子Granzyme B以及IFN-γ的表达。这些结果表明DCDC2通过激活FGL1-LAG-3轴抑制CD8+T细胞功能，从而驱动ICC的免疫逃逸。研究者进一步研究靶向LAG-3可以抑制DCDC2的促肿瘤作用。

4.发现DCDC2相互作用蛋白ENO1

研究者通过Co-IP联合质谱分析发现DCDC2与ENO1相互作用，并通过其DCX结构域与ENO1的TIM barrel结构域结合。进一步实验表明，DCDC2通过抑制FBXW7介导的ENO1泛素化降解来稳定ENO1蛋白水平，从而延长其半衰期。功能上，ENO1被证实是DCDC2下游的关键效应分子，其敲除可逆转DCDC2对AKT磷酸化的激活，并抑制DCDC2驱动的ICC细胞增殖、迁移和侵袭。DCDC2通过稳定ENO1，促进ENO1的核内表达增加，进一步促进ENO1结合FGL1启动子，从而上调FGL1基因表达。这些结果表明DCDC2通过通过稳定ENO1激活AKT信号通路，并上调FGL1表达，从而发挥促ICC生长、转移及免疫逃逸的作用。